化學發光試劑的作用

  化學發光試劑原理：辣根過氧化酶使試劑中的發光物（Luminol）氧化并發光，而試劑中含有增強劑這使得發光增強了1000倍。在免疫印跡中，將復雜的蛋白混合物經SDS-PAGE分離，并轉移到固相膜上（如NC、PVDF）等，用于免疫學檢測，經HRP標記的抗體與膜上的蛋白直接（標記一抗）或間接（標記二抗）反應。當加入免疫印跡化學發光試劑后，Luminol發生氧化降解，并發射波長為428nm的光，此光可經X光膠片(放射自顯影片)感光記錄下來。

  化學發光試劑使用方法： 印跡膜制備 按常規方法完成SDS-PAGE和電轉膜操作，適當的封閉非常重要。可以通過標記一抗或二抗的手段引入HRP，一般采用市售的HRP二抗交聯物。仔細地淋洗對于降低背景非常重要，在與HRP交聯物溫育后，膜片更需仔細洗滌，所有步驟均在室溫下完成。

  化學發光試劑的配置 在使用前等量混合A液和B液，混合后盡快使用。將膜片置混合液中于室溫下振蕩溫育2分鐘，每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2ml以覆蓋全膜片。蛋白信號顯現,用平頭鑷鉗住膜片，垂直置于吸水紙以吸去過量試劑。置膜片于二層保鮮膜之間，小心趕盡氣泡。將膜片吸附蛋白面朝上，置于X光片盒中。于暗室中壓上X光片。根據信號的強弱適當調整曝光時間，一般為1min或5min，也可選擇不同時間多次壓片，以達*效果。顯影沖洗。調節曝光時間，再次曝光顯影。膜的重復使用：配置62.5mM Tris-Hcl,PH6.7,2%SDS, 7ml/100ml的巰基乙醇的溶液，膜放入后，70?C振蕩水浴30分鐘。再用TBST或PBST緩沖液洗脫，zui后用BSA（牛血清白蛋白）或牛奶封閉。

  化學發光試劑操作注意：本試劑每個批號均獨立優化，請不要混用或稀釋本試劑以免降低敏感性；加入一抗后膜不能再干燥；適當地封閉和洗滌膜片至關重要；使用前配置化學發光試劑，配置足夠覆蓋膜片即可，棄去使用過的混合試劑；使用干凈取樣頭取用每種試劑； *張片子建議曝光1分鐘，觀察結果后判斷*曝光時間可從30秒至2小時不等；除了放射自顯影片曝光和洗片處理外，所有步驟均不必在暗室中操作；膜片可經適當方法洗脫原有抗體，再次印跡使用，在此情況下，此試劑更為理想；因為它不象生色物質需要從膜片上清除底物。NaN3能抑制HRP活性，應避免使用NaN3。本公司因為專業,所以*.